兔主動脈平滑肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定

目的：

從兔主動脈中分離出原代平滑肌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定；

一、材料：

3-8周齡兔、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗PBS、DMEM、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管;

二、方法：

1)空氣栓塞致死，無菌條件下取出主動脈，PBS反復(fù)清洗;

2）洗干凈后用小鑷子剝除外膜纖維結(jié)締組織，用眼科剪將血管縱行剪開，眼科彎鑷刮除血管內(nèi)膜和肌層，以去除內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，剩余的為外膜;

3）浸泡于PBS中并沖洗干凈，剪成約 1mm 的組織塊 ，將移入培養(yǎng)瓶，擺布均勻，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使瓶底向上，組織塊位于培養(yǎng)瓶上方，加人 4～5mL含 20％FBS的 DMEM培養(yǎng)液，旋松瓶口，放入 CO2 孵箱培養(yǎng)；

4）3～4h后輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使組織塊浸人培養(yǎng)液中，絕對靜置培養(yǎng)3d，4～6d后換液，可見散在、梭形細(xì)胞從組織塊邊緣爬出，8～10d 出現(xiàn)致密細(xì)胞層 ，隔天換液 1次；

三、鑒定：

陽性：α-SMA Desmin

陰性：Vimentin