兔纖維環(huán)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定

一、材料：

3-8周齡兔、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗PBS、M199、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、干細(xì)胞專用培養(yǎng)液；

二、方法：

1)下取白兔的椎體，剔除周?chē)募∪夂晚g帶,完整取出各段的椎間盤(pán)，將其放入含有5％雙抗低糖DMEM培養(yǎng)基中，將椎間盤(pán)移至超凈臺(tái)中，將髓核移除，獲得的纖維環(huán)組織；

2）用PBS清洗3遍 ，將其剪成1mm×1mm×1mm大小的組織，加入質(zhì)量濃度為0.2%I型膠原酶，放置于37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱中 每隔1h吹打1次，待組織塊完全消化后，終止消化使用200目網(wǎng)篩過(guò)濾；

3）PBS重懸，1000r／min離心 5 min，重復(fù)2次，種盤(pán)；