一、產(chǎn)品詳情:
1. 產(chǎn)品名稱:人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,Human Umbilical Vein Endothelial Cells 貨號(hào):PC-H-18101
2. 組織來源:人臍靜脈組織
3. 細(xì)胞形態(tài):細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),呈現(xiàn)鋪路石狀鑲嵌排列,細(xì)胞為扁平多角形,辯解**,包漿豐富
4. 發(fā)貨形式:新鮮原代細(xì)胞或凍存原代細(xì)胞
5. 細(xì)胞簡(jiǎn)介:本公司生產(chǎn)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶消化制備而來,細(xì)胞總量約為5×105個(gè)/瓶,細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,且不含HIV-1,HBV,HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和**等。
6. 注意事項(xiàng):該細(xì)胞只可用于科研。
二、產(chǎn)品手冊(cè)
產(chǎn)品介紹:
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自臍帶靜脈,一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究,例如大分子轉(zhuǎn)運(yùn)、血液凝固、血管發(fā)生和纖維蛋白溶解等等。
質(zhì)量控制:
本產(chǎn)品經(jīng)過了**/細(xì)菌、支原體、內(nèi)**檢測(cè)。
本產(chǎn)品還經(jīng)過細(xì)胞復(fù)蘇活力檢測(cè),細(xì)胞周期檢測(cè),分化潛能鑒定。
本產(chǎn)品經(jīng)過光鏡檢測(cè)形態(tài),經(jīng)Western blot檢測(cè)蛋白標(biāo)記物的表達(dá)鑒定。
該產(chǎn)品*提供給進(jìn)一步科研使用,不可應(yīng)用于臨床**等其他方面。
產(chǎn)品特性:
在進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí),通常選用的細(xì)胞模型為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,而不是直接采用靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞或者動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞。原因是臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有干細(xì)胞的潛能,理論上可以傳代50-60次,且具有血管生成、遷移等特點(diǎn)。
細(xì)胞相關(guān)操作
細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行。
收到復(fù)蘇好的貼壁細(xì)胞的處理方法:
1. 先從外包裝盒中拿出細(xì)胞瓶,在細(xì)胞瓶表面噴一層酒精,并小心去掉封口膜;
2. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),并確定是否染菌,如有染菌,請(qǐng)立即拍照,并將細(xì)胞丟棄;
3. 將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí);
4. 倒掉多余的培養(yǎng)基,留正常體積的培養(yǎng)基;
5. 重新將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜;
6. 第二天傳代。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1. 37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2. 從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(注意:解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞)
3. 在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5分鐘;
4. 棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕混勻;
5. 置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(注意:培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6. 第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代:
1. 當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí),給細(xì)胞傳代;
2. 37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
3. 在超凈臺(tái)中,棄培養(yǎng)基,加入2-5ml PBS清洗細(xì)胞后,再加入1ml胰酶消化細(xì)胞;
4. 顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓,有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí),加入5ml培養(yǎng)液終止消化;
5. 用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞,并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散;
6. 將細(xì)胞移入離心管中,1000rpm離心5分鐘;
7. 棄上清,加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中(確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間),細(xì)胞密度在1×104個(gè)/cm2(2.5×105 Cells/T25瓶),混勻細(xì)胞懸液,確保細(xì)胞均勻分布;
8. 將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存:
1. 37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2. 消化細(xì)胞后給細(xì)胞計(jì)數(shù);
1) 洗凈晾干血小板計(jì)數(shù)板和蓋玻片,將蓋玻片完全覆蓋計(jì)數(shù)區(qū);
2) 充分混勻細(xì)胞,取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺(tái)盼藍(lán)混合,移液器吹吸混合均勻,用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞,以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳;
3) 顯微鏡下,計(jì)數(shù)四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù)目,無活性細(xì)胞染成藍(lán)色,活細(xì)胞不被染色;
4) 細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2;這里10000是不變的,因?yàn)橛?jì)數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm,即10-4cm3計(jì)數(shù)池內(nèi),1cm3=1ml,將四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)目除以4取平均數(shù),乘以2是補(bǔ)償加等體積臺(tái)盼藍(lán)形成的稀釋。
5) 細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%
注:細(xì)胞密度高時(shí),可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺(tái)盼藍(lán)的比例,計(jì)數(shù)時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。
3. 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí),可以凍存細(xì)胞。
4. 在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管,1000rpm離心5分鐘;
5. 棄上清,用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞,并調(diào)整細(xì)胞密度為1-3×106/ml;
6. 將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管);
將裝有細(xì)胞的凍存管置于-20°C放1-2小時(shí)后,-80°C過夜后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果分析:
利用流式細(xì)胞儀對(duì)分選的原代HUVECs進(jìn)行鑒定。vWF和CD31的表達(dá)呈陽性,而a-SMA以及CD45的表達(dá)呈陰性。
以及采用CD31抗體的免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示CD31蛋白熒光陽性。
圖片如下: