小鼠表皮干細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

【簡介】

表皮干細(xì)胞（ESCs）是一類具有無限增殖能力，可增殖分化為表皮中各種功能細(xì)胞的細(xì)胞群，主要位于表皮基底層，屬于成體干細(xì)胞，具有很強(qiáng)的分裂增殖能力，以補(bǔ)充衰老脫落的角質(zhì)細(xì)胞。表皮干細(xì)胞具有干細(xì)胞的特征：未成熟、體積小、細(xì)胞器小、克隆形成能力高、細(xì)胞周期慢、無限次分裂等；

【材料】

1d小鼠、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗PBS、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、胰酶；

【方法】

1、無菌條件下取新生鼠背部皮膚，PBS沖洗3次；

2、用0 .25%胰酶4℃消化一夜，分離表皮與真皮；

3、用0 .25%胰酶和0 .01%EDTA37℃消化表皮，5倍體積的完全培養(yǎng)基終止消化；

4、1200rpm轉(zhuǎn)速下離心8min，棄上清，重懸細(xì)胞獲得表皮干細(xì)胞單細(xì)胞懸液。接種于培養(yǎng)板，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

【培養(yǎng)】

干細(xì)胞專用培養(yǎng)液

【鑒定】

1）熒光鑒定

陽性：CD44、CD90；

陰性：CD34、CD45；

2）三項分化

進(jìn)行成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)鑒定；