兔骨骼肌細胞原代分離培養(yǎng)
【簡介】
骨骼肌的一般形態(tài)特征肌細胞呈纖維狀,不分支,有明顯橫紋,核很多,且都位于細胞膜下方,肌細胞內(nèi)有許多沿細胞長軸平行排列的細絲狀肌原纖維;
【材料】
細胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、10%FBS的DMEM培養(yǎng)基、PBS緩沖液;
【方法】
1)兔處死,取胸大肌約1cm3,并將其剪成1mm3大小的肌小粒。
2)反復用緩沖液洗去血細胞,將肌小粒小心貼附于細胞培養(yǎng)皿,將皿底向上輕置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中;
3)2~4h后輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿,補足培液使肌小粒浸浴于培養(yǎng)液中,3d換液一次,待細胞長滿即可傳代;
【培養(yǎng)】
DMEM培養(yǎng)基(10%FBS)
【鑒定】
1)免疫熒光:
2)陽性:肌蛋白(a-Actin)、結(jié)蛋白(Desmin);