? 外泌體的提取方法有哪些？

  ① 經(jīng)典的超速離心法

  ② 柱純化法

  ③ 超濾法

  ④ 大分子聚合物沉降法

  ⑤ 磁珠免疫沉淀法

? 如何選擇一款合適的提取方式？

  ① 是否具備一臺超速離心機？是否不嫌麻煩、耐得住性子？

   為了完成一次密度梯度超速離心，需要整整一天時間來做各種操作：配制不同濃度的氯化銫、預(yù)裝密度梯度液、加樣、超離管配平（懂的自然懂）、超速離心 12～16 個小時，這些都不是最難的步驟，最難的就是離心后扎針取樣了！  

   有誰被扎了，還沒有取到樣的，再舉個手！師兄同情你 30 秒...

② 是否有高速離心機

  大概 90% 以上實驗室都具備高速離心機，那么就僅考慮靠高速離心機的外泌體提取方法，比如大分子聚合沉降法或者超濾法，可購買基于大分子聚合物方法的試劑盒或者超濾管。

③ 購買商品化試劑盒時該如何選？

  最重要的是要了解單位體積樣品的抽提費用是多少，做好預(yù)算，要不太貴了老板也會心疼經(jīng)費的！苦思冥想申請個基金也不容易，勤儉持家才能長長久久！

? 外泌體提取前做哪些工作準(zhǔn)備？

  最重要的是樣品前期處理工作，這個做好了提取才有意義，才有科學(xué)價值。

  ① 迅速性原則：要最大限度的縮短從樣本采集到實驗的時間。

  ② 低溫原則：所取樣本離體后，保證在實驗前始終處于 -70℃ 以下，以避免外泌體降解。

  ③ 必須的預(yù)處理操作：針對細(xì)胞上清液樣品、血清或者血漿樣品、尿液、腦脊液、腹水等樣品，需要先做低速離心 (< 3,000 rpm) 去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片后，再將樣品存放在 -80℃ 冰箱中。

? 提取的外泌體如何保存呢？

  提取好的外泌體凍存在 -80℃ 冰箱中不就完事了嗎？有很多人疑惑。

當(dāng)然不是，當(dāng)富集后的外泌體放到 -80℃ 冰箱凍存后，就如同冰凍丸子一樣，它們一個挨著一個，粘在一起，即使解凍后也未必會分的很開。

  使用這樣融化后的外泌體去做電鏡和粒徑檢測的時候就會遇到一些問題：形態(tài)太丑、成團或者黏連、顆粒太大，超過外泌體的官方標(biāo)準(zhǔn)尺寸，這些都是由于外泌體冷凍后造成的，都是客觀情況。