產(chǎn)品名稱:溫和型干細(xì)胞消化酶 產(chǎn)品規(guī)格:100ml
產(chǎn)品貨號:JXS0501 儲存條件:2-8℃保存,20℃長期保存
溫和型干細(xì)胞消化酶專門用于干細(xì)胞的消化,包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,
胚胎干細(xì)胞(ES)等。傳統(tǒng)胰蛋白酶只要接觸到細(xì)胞,就持續(xù)不斷的切割蛋白的精氨酸及賴氨
酸C末端形成的肽鍵。溫和型干細(xì)胞消化酶與胰蛋白酶的作用機(jī)理不同,它只消化細(xì)胞與細(xì)胞之
間,以及細(xì)胞與培養(yǎng)瓶之間的細(xì)胞外基質(zhì),而不損傷細(xì)胞膜的完整性, 因此消化作用溫和,對
干細(xì)胞的損害極小。即使消化時間超過10分鐘,細(xì)胞活率仍可保持90%以上,對干細(xì)胞的后續(xù)
傳代也幾乎沒有影響,減少了對操作人員技能的要求。
1、即用型 ,無需配制,4℃保存。
2、操作便利,無需消化終止,細(xì)胞存活率高。
3、成分明確,純?nèi)斯ず铣?,無任何動物源成分。
4、安全性高,更適合臨床研究及藥物申報用途。
5、避免了消化過度,使大規(guī)模干細(xì)胞生產(chǎn)成為可能。
一、細(xì)胞消化前準(zhǔn)備(以T25瓶為例)
1、觀察貼壁細(xì)胞長至80%-90%左右,棄去細(xì)胞培養(yǎng)液。
2、用5ml無鈣鎂的HBSS溶液或PBS清洗貼壁細(xì)胞,棄去清洗液。
二、細(xì)胞消化過程(以T25瓶為例)
1、向T25瓶中加入1ml干細(xì)胞溫和消化酶,置于37度培養(yǎng)箱中消化細(xì)胞。
2、約3min后,細(xì)胞變圓,立即加入5mLPBS溶液進(jìn)行稀釋。
3、將上述6mL含細(xì)胞液體轉(zhuǎn)移至離心管中,置于離心機(jī)中離心1000rpm,3min
4、去除離心管中的上清液。
5、根據(jù)接下來的應(yīng)用目的加入干細(xì)胞培養(yǎng)基(細(xì)胞傳代用途)或細(xì)胞凍存液(細(xì)胞凍存用途)。
Q: 為什么要開發(fā)干細(xì)胞溫和消化酶產(chǎn)品?
A:消化過度與生長過密是干細(xì)胞培養(yǎng)失敗的前兩大原因。在生產(chǎn)級的大規(guī)模培養(yǎng)中,消化過度更是
一個難以控制的工藝難題。溫和消化酶就是為了解決這個問題而設(shè)計的:在該產(chǎn)品的消化時間挑
戰(zhàn)實驗中,浸潤在溫和酶中長達(dá)30min的干細(xì)胞,細(xì)胞活率均能保持在90%以上,表型正常,且后
續(xù)傳代正常
Q:干細(xì)胞溫和消化酶的保存溫度條件是2-8℃。我如果-20℃保存,會不會更好?
A:該酶蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,在2-8℃條件下也可穩(wěn)定保存。若放置-20℃環(huán)境,應(yīng)避免反復(fù)凍融問題,否則
會導(dǎo)致該酶活性下降,細(xì)胞消化時間延長。 建議分裝后置于-20℃長期保存。
Q:用無血清培養(yǎng)基及含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的干細(xì)胞,在使用溫和酶消化方面有什么異同?
A:相同之處是:無論使用何種培養(yǎng)基,在消化前均需要使用無鈣鎂離子的緩沖液沖洗細(xì)胞。
不同之處:如果使用無血清培養(yǎng)基,清洗一次即可。如果使用血清培養(yǎng)基,應(yīng)當(dāng)連續(xù)清洗細(xì)胞三
次,以確保無血清殘留,否則消化時間會變長。
Q:在消化時間方面,溫和消化酶與傳統(tǒng)胰酶有什么差別?
A:溫和型干細(xì)胞消化酶在消化時間上要稍長一些。一般消化干細(xì)胞需要2-5min左右的時間??筛鶕?jù)
細(xì)胞狀態(tài)及種類適當(dāng)延長消化時間,且不會對細(xì)胞活性產(chǎn)生影響。傳統(tǒng)胰酶要嚴(yán)格控制消化時間
Q:溫和消化酶消化細(xì)胞后,需要添加培養(yǎng)基或胰酶抑制劑終止消化過程嗎?
A:不需要。細(xì)胞變圓后添加細(xì)胞培養(yǎng)上清或PBS溶液稀釋即可。
Q:添加完細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋后,可不離心去除消化酶嗎?
A:不可以。殘留的消化酶會影響后續(xù)干細(xì)胞的培養(yǎng)過程,會導(dǎo)致干細(xì)胞的形態(tài)變化。