兔胃黏膜上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定
【簡(jiǎn)介】
胃黏膜上皮細(xì)胞是被覆于胃黏膜表面的單層柱狀細(xì)胞,在胃黏膜表面排列整齊,頂部細(xì)胞質(zhì)充滿黏原顆粒,胃是消化系統(tǒng)的重要器官,胃黏膜上皮細(xì)胞直接接觸大量來(lái)自外界的及內(nèi)部代謝產(chǎn)生的損傷物,由于許多消化系疾病均與胃黏膜損傷有關(guān),而胃黏膜上皮細(xì)胞是保護(hù)胃黏膜的最重要屏障,故對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞的研究尤顯重要;
【材料】
3-8周齡兔、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、DMEM、PBS、D-Hanks;
消化液:MEM(25ml)、 II型膠原酶(0.15%)、胰酶(0.25%);
【方法】
1)非禁食兔麻醉,打開腹腔,將胃取出,放入冰冷的生理鹽水中沖洗胃表面,洗滌胃內(nèi)容物和黏液;
2)將組織浸泡在預(yù)冷含雙抗的D-Hanks中5min;
3)將胃組織攤開,浸泡在消化液中,消化15min;
4)搜集細(xì)胞懸液,過(guò)200目網(wǎng)篩,D-Hanks離心800r/5min,2次;
5)上皮專用培養(yǎng)液種盤,40分鐘后,上清換盤培養(yǎng),利用差速貼壁去除雜細(xì)胞;
【培養(yǎng)】
上皮專用培養(yǎng)基
【鑒定】
1)免疫熒光:
陽(yáng)性:ck18
陰性:vimentin