兔脂肪間充質干細胞分離培養(yǎng)及鑒定

【簡介】

脂肪干細胞是從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞。主要恢復組織細胞的修復功能，促進細胞的再生，恢復年輕面容的同時，身體機能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內而外真正的有效抵抗衰老。

【材料】

2把眼科直剪，1把彎鑷、2支左右15mL離心管、6cm或10cm Dish、70um網篩、含10%FBS 的DMEM干細胞專用培養(yǎng)基、雙抗PBS、75%的酒精、0.06%膠原酶I；

【方法】

1）白兔用速眠新以0．2 mL／kg的劑量麻醉；

2）切取腹股溝處脂肪組織，去除肉眼可見的血管和筋膜組織，PBS沖洗；

3）剪成1mm³的組織塊，移入15ml離心管，加入0.06%膠原酶I，37°溫箱消化50min；

4）消化后向管內加1~2倍體積PBS吹打消化液，過70um篩網，1000RPM/5min，棄上清和脂肪層，再加入PBS重懸細胞沉淀重復離心1~2次；（離心管內會有很多油，PBS清洗多次還是去除不掉，重懸細胞沉淀時多注意，盡量避免脂肪混合培液）

5）專用培養(yǎng)液重懸后移入培養(yǎng)皿，37°溫箱，5%CO₂培養(yǎng)，24h后PBS清洗換液；

代;

【培養(yǎng)】

干細胞專用培養(yǎng)液

【鑒定】

流式細胞鑒定：

陽性：CD29、CD90、CD44、CD105、CD166、CD13;

陰性：CD34、CD45、CD80、CD86、CD117;