Western blot ECL 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒（超敏）

發(fā)布日期：2019-09-10?瀏覽次數(shù)：361

Western blot ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒使用說明書

產(chǎn)品簡(jiǎn)介
       Western blot ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒可用于檢測(cè)辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的蛋白或核酸底物。 本產(chǎn)品采用全新的發(fā)光增強(qiáng)劑，并對(duì)各種成分進(jìn)行優(yōu)化，使之具有以下幾個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn)：1、靈敏度高， 微弱的信號(hào)也能檢測(cè)，所以允許使用更高的抗體稀釋倍數(shù)，（1: 4000-1: 10000），極其節(jié)省抗體； 2、 有效降低發(fā)光試劑造成的非特異發(fā)光和背景發(fā)光，從 而避免發(fā)光試劑造成"非特異條帶”或"背景條帶”； 3、 不破壞膜上蛋白，可在曝光后，經(jīng)洗滌，對(duì)多種蛋白進(jìn)行雜交； 4、發(fā)光更加穩(wěn)定可靠，從而避免“發(fā)光淬滅"以及人為干擾。

試劑盒組分

實(shí)驗(yàn)步驟
1、     按常規(guī)Western blot操作，電泳、轉(zhuǎn)膜、一抗 孵育、二抗孵育后，進(jìn)行**一次洗滌時(shí)，根據(jù)膜的大小，新鮮配制發(fā)光工作液。將溶液A、溶液B按1:1 比率混合，制成發(fā)光工作液（每1cm²膜需要0.125ml 發(fā)光工作液）；
2、     用鑷子取出膜，并搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。膜的蛋白面朝上，將配制的發(fā)光檢測(cè)液均勻覆蓋到蛋白膜上，室溫孵育1分鐘左右；
3、     用鑷子將膜夾起5-10秒，并將膜的下緣與濾 紙輕輕接觸以除去膜上多余的發(fā)光液，迅速將膜完全 包裹于潔凈保鮮膜內(nèi)，去除氣泡和褶皺，蛋白面朝上 固定于X片暗盒；
4、     在暗室中取一張X片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分鐘。立即顯影定影，根據(jù)其曝光強(qiáng)度，縮短或延長(zhǎng)下一張X片的曝光時(shí)間（對(duì)微弱信號(hào)，曝光時(shí)間可延長(zhǎng)至數(shù)小時(shí)）；
5、     對(duì)同一張膜進(jìn)行多次蛋白雜交：用PBST或 TBST洗滌掉發(fā)光液（10minx3次），然后從開始一 抗雜交即可。
注意事項(xiàng)
1、     避光條件下，配制好的化學(xué)發(fā)光工作液在室溫下可穩(wěn)定8小時(shí)。但不宜暴露于強(qiáng)光下時(shí)間過久，請(qǐng) 避光保存。正常實(shí)驗(yàn)室燈光短時(shí)間照射不影響工作液的使用；
2、     長(zhǎng)時(shí)間曝光或蛋白質(zhì)過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊；
3、     為了得到**的曝光效果，優(yōu)化一抗、二抗的稀釋比例；
4、     整個(gè)免疫印跡實(shí)驗(yàn)過程請(qǐng)確保印跡膜始終處于濕潤(rùn)狀態(tài)，避免干燥；
5、     避免使用NaN₃回收HRP偶聯(lián)的抗體，因?yàn)镹aN₃能**HRP的活性；
6、     NaN₃能**HRP活性，回收二抗時(shí)應(yīng)避免使用NaN₃,如必需使用勿超過0.01%;
7、     在封閉緩沖液及所有抗體稀釋液中加入高質(zhì)量的吐溫-20 （終濃度為0.05% ），以減少非特異性 結(jié)合；
8、     某些市售的保鮮膜會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。