BCA 蛋白定量檢測(cè)試劑盒

BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒
（BCA Protein Assay Kit）

產(chǎn)品信息：

運(yùn)輸與保存方法：
    室溫運(yùn)輸。試劑盒室溫保存即可，長(zhǎng)期不用的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA）也可放到4°C保存，有效期12個(gè)月。
產(chǎn)品描述：
    BCA法是目前應(yīng)用比較**的蛋白質(zhì)濃度定量測(cè)定方法。基于雙縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu²⁺還原成Cu⁺，產(chǎn)生一種紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。與Lowery法相比，BCA蛋白濃度測(cè)定法實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、快速和穩(wěn)定性佳。與Bradford法相比具有受去垢劑的影響較小等**優(yōu)勢(shì)。試劑盒中提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為用戶(hù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)提供了便利。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1)       靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到5 μg/ml。
2)       速度快，比一般的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒顯色所用時(shí)間短。
3)       線(xiàn)性范圍廣，25-2000 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線(xiàn)性范圍。
4)       不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。
操作方法：

一、配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液

1、配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA）品系
   注：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)@樣可以****降低溶液中各種成分的干擾。但是也可以用0.9%的NaCl或者1×PBS溶液進(jìn)行稀釋。

BSA標(biāo)準(zhǔn)品的配制可參考表一：
表一、BSA標(biāo)準(zhǔn)品系配制（線(xiàn)性范圍25-2000μg/ml）

注：微孔板檢測(cè)每管需要100 μl標(biāo)準(zhǔn)品，如果用比色皿檢測(cè)，按3個(gè)重復(fù)計(jì)算，每個(gè)濃度至少配制300 μl。
如果樣品的濃度比較低，則可以按照以下加強(qiáng)試管的稀釋方案（線(xiàn)性范圍為5-250μg/ml）進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作。

表二、BSA標(biāo)準(zhǔn)品系配制（線(xiàn)性范圍5-250μg/ml）

 2、配制BCA工作液

            1）計(jì)算所需要的總BCA工作液體積
                         總BCA工作液體積=（標(biāo)準(zhǔn)品+待測(cè)樣品）×重復(fù)數(shù)×每個(gè)樣品所需要的BCA工作液
   注：微孔板檢測(cè)每個(gè)樣品加200μl BCA工作液，比色皿檢測(cè)時(shí)每個(gè)樣品加2.0ml BCA工作液。

            2）配制BCA工作液：50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1）,充分混勻。
   注：BCA試劑B加入后，溶液迅速混濁，通過(guò)混勻后立即變澄清。BCA工作液**現(xiàn)用現(xiàn)配，檢測(cè)前4小時(shí)之內(nèi)配制后裝入密封容器內(nèi)存放，試劑比較穩(wěn)定。

二、檢測(cè)方法

1、微孔板檢測(cè)方法
          1）各取10 μl標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到微孔板中。
    注：樣品與工作液的比例可根據(jù)待測(cè)樣品的量而定，若樣品有限，可適量減少標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣品的用量，該試劑盒的檢測(cè)范圍為25-2000 μg/ml。
          2）每孔加入200 μl BCA工作液，振蕩充分混勻后，避光置于37°C，孵育30min。
          3）冷卻至室溫，在酶標(biāo)儀上的540~595nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)檢測(cè)吸光度，其中562nm波長(zhǎng)的吸光度為**。
    注：由于酶標(biāo)板的光徑較短，需要更好的樣品與工作液的比率來(lái)獲得較好的檢測(cè)靈敏度；若檢測(cè)波長(zhǎng)大于562nm，建議延長(zhǎng)孵育時(shí)間，*長(zhǎng)至2小時(shí)；
          4) 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即*終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（X-*終的OD_562nm讀數(shù)， Y-蛋白濃度μg/ml）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。

2、比色皿檢測(cè)方法
          1）各取100 μl標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到反應(yīng)管中。
          2）每孔加入2.0 ml BCA工作液，振蕩充分混勻后，避光置于37°C，孵育30min。
注：由于酶標(biāo)板的光徑較短，需要更好的樣品與工作液的比率來(lái)獲得較好的檢測(cè)靈敏度；若檢測(cè)波長(zhǎng)大于562nm，建議延長(zhǎng)孵育時(shí)間，*長(zhǎng)至2小時(shí)；
          3）冷卻至室溫，在酶標(biāo)儀上的540~595nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)檢測(cè)吸光度，其中562nm波長(zhǎng)的吸光度為**。
注：由于酶標(biāo)板的光徑較短，需要更好的樣品與工作液的比率來(lái)獲得較好的檢測(cè)靈敏度；若檢測(cè)波長(zhǎng)大于562nm，建議延長(zhǎng)孵育時(shí)間，*長(zhǎng)至2小時(shí)；
          4) 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即*終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（X-*終的OD_562nm讀數(shù)， Y-蛋白濃度μg/ml）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。