大鼠食管上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定
【簡介】
【材料】
成年豚鼠、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、DMEM、PBS、D-Hanks、胰酶;
【方法】
1)處死大鼠,取食管組織,去除肌肉層,PBS清洗;
2),將上皮層組織剪成1mm×1mm×1mm組織碎片,加入0.1%I型膠原酶消化2-4h;
3)消化液渾濁后終止消化,過200目細(xì)胞網(wǎng)篩,1000rpm,5min離心,去上清,沉淀重復(fù)離心2次;
4)細(xì)胞沉淀種明膠包被的培養(yǎng)皿中,隔天換液;
【培養(yǎng)】
上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液
【鑒定】
1)免疫熒光:
陽性:CK18