豚鼠耳神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定
【簡(jiǎn)介】
神經(jīng)節(jié)細(xì)胞較大,直徑可達(dá)30微米,形態(tài)可為圓形、卵圓形、梨形,類(lèi)似中樞神經(jīng)系者含有清晰的圓形或橢圓形核及明顯的核仁,尼氏小體發(fā)育良好。
【材料】
成年豚鼠、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、DMEM、PBS、D-Hanks、0.2% II型膠原酶、0.2% dispase II;
【方法】
1)處死豚鼠,取神經(jīng)節(jié),PBS清洗;
2)組織加入0.2% II型膠原酶和0.2% dispase II,37℃消化30min;
3)1000rpm/min離心5min,加入酶,從新消化20min,重復(fù)2次;
4)1000rpm/min離心5min后去除上清.重新加入無(wú)血清限制性培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,輕輕吹打10次.靜置2min后,將上面細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到另一離心管.余下組織塊多次重復(fù)上述過(guò)程,直至組織塊基本消散為止;
5)細(xì)胞沉淀接種于多聚賴(lài)氨酸包被的培養(yǎng)皿中,3天換一次液;
【培養(yǎng)】
神經(jīng)元專(zhuān)用培養(yǎng)液(2%B-27+20ug/ml NGF+DMEM/F12)
【鑒定】
1)免疫熒光:
陽(yáng)性:NF,C-FOS