【簡介】
成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞,負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌,并促進(jìn)基質(zhì)礦化形成骨組織;骨不斷地進(jìn)行著重建,骨重建過程包括破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域,分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì),分泌蛋白酶消化骨基質(zhì),形成骨吸收陷窩;其后,成骨細(xì)胞移行至被吸收部位,分泌骨基質(zhì),骨基質(zhì)礦化而形成新骨;
【材料】
3-8周齡兔、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗PBS、DMEM/F12、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、胰蛋白酶;
【方法】
1)取手術(shù)切除的骨膜,放入盛有PBS緩沖液的培養(yǎng)皿中,去除附著于骨膜上的結(jié)締組織,將骨膜剪碎成1~2 mm2大小的組織塊;
2)加入0.1 % EDTA與0.25%胰蛋白酶混合消化液,置于37℃條件下消化20~30分鐘,進(jìn)行1000r/min離心1~2分鐘,沉淀骨膜組織塊,棄去上清液,用PBS緩沖液洗滌沉淀骨膜組織塊2~3次,重復(fù)上述離心(1000r/min離心1~2分鐘)過程,37℃條件下再用1mg/ml I型膠原酶消化骨膜組織塊約90分鐘,進(jìn)行1000r/min離心5~10分鐘以沉淀細(xì)胞,棄去消化液;
3)用培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞沉淀1~2次,離心(1000r/min離心10分鐘)收集細(xì)胞;
【培養(yǎng)】
軟骨專用細(xì)胞培養(yǎng)液
【鑒定】
堿性磷酸酶染色 (AKP)