兔胰腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定
【簡介】
上皮細(xì)胞覆蓋于身體表面并襯貼于體內(nèi)空腔器官腔面的細(xì)胞,上皮細(xì)胞具有強(qiáng)大的角生和更新能力。上皮組織具有保護(hù)、吸收、分泌和排泄等作用。當(dāng)上皮細(xì)胞受損時,則影響機(jī)體的防御功能;胰腺的內(nèi)分泌物主要有胰島素、胰高血糖素、胃泌素及生長抑素等,與機(jī)體內(nèi)的營養(yǎng)代謝及調(diào)節(jié)有關(guān);
【材料】
動物:2-20周齡兔;
器械耗材:手術(shù)剪、手術(shù)鑷、 15ml離心管試劑、75%酒精、DMEM、雙抗、PBS、膠原酶、胰蛋白酶、上皮專用培養(yǎng)液;
【方法】
膠原酶聯(lián)合胰酶消化法
1)兔處死,取出胰腺組織,剪碎,PBS清洗;
2)組織碎塊加入混合酶進(jìn)行消化,組織消化完后收集細(xì)胞懸液;
3)細(xì)胞懸液離心,收集沉淀,再用PBS重懸離心;
4)上皮專用培養(yǎng)液種細(xì)胞,37℃,5co2,48小時首換液;
【培養(yǎng)】
上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液;
【鑒定】
1)免疫熒光
陽性:角蛋白18(Cytokeratin 18)
陰性:vimentin