用途

常用于研究腫瘤細胞的成瘤能力、腫瘤細胞的轉移、腫瘤細胞的耐藥和靶分子對腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展的影響等等。

材料與儀器

1、動物選購：一般選擇 6 周齡左右，體重為 18~22 g 的裸鼠，檢疫通過后，飼養(yǎng)于隔離屏障環(huán)境。

2、腫瘤細胞準備：注意計算好細胞用量，細胞量一般為 5 × 106 個/200 μl（不同細胞系的接種量可能不同）。

3、耗材準備：PBS×1、75% 酒精×1、濾紙×3 張、手套、器械盒（主要有彎剪、鑷子、1 ml 注射器和止血夾）、棉球等。

步驟

1、腫瘤細胞擴增：

（a）取腫瘤細胞復蘇并擴增，用 0.25% 胰酶消化，1 000 rpm 離心。

（b）去除上清，加入 1×PBS 將細胞洗一遍，再加入 1×PBS 重懸，計數(shù)，按比例稀釋細胞懸液，調(diào)整為約 5 × 106 個/200 μl 的細胞懸液。

（c）用無血清的培養(yǎng)基吹勻離心兩遍，再用無血清的培基重懸混勻，置于 0.5 ml 的 EP 管中，冰上備用（考慮到細胞活性，應盡快注射到裸鼠皮下）。

2、成瘤過程：

（a）根據(jù)實驗要求分組，每組小鼠至少 5 只以上。

（b）抓取時用大拇指和食指抓住裸鼠的整個背部和頭部，無名指和小指壓住小腿和尾巴。棉球蘸取酒精后擦拭注射部位（背部或腋下）。用 1 ml 注射器（選擇常規(guī) 1 ml 注射器即可）吸取 200 μl 細胞懸液，注射至裸鼠表皮下。

3、成瘤后：

（a）注射瘤細胞后通常在 3 天后肉眼觀察，并在每次觀察時都記錄裸鼠的體重。

（b）成瘤之后需要定時用標尺記錄腫瘤的長軸和短軸變化，并記錄統(tǒng)計。

（c）根據(jù)實驗要求，達到時間后頸椎脫臼處死裸鼠，取出腫瘤，拍照記錄。拍照時注意光線，對焦清楚。

（d）計算腫瘤體積公式為：長軸×寬軸 2/2。

注意事項

（a）細胞在大量擴增時為了保證細胞的活性，可以適當增加血清和抗生素濃度。

（b）皮下注射成功的標準：皮下注射形成可以推動的明顯突起（參考水痘）。

（c）皮下注射瘤細胞懸液后停留幾秒再拔出針頭，以防止懸液隨針頭滲漏。

（d）注射成瘤后的小鼠容易死亡，注意實驗周期。

（e）可以先進行各 3 只分組的預實驗，如果在裸鼠中實在無法成瘤，可以選擇其他免疫缺陷型，如 NOG、SCID 等小鼠。

（f）裸鼠成瘤由于存在個體差異，可能無法成瘤，所以在分組時盡量多，或成瘤后再進行隨機分組。

（g）提高細胞的濃度能夠提高成瘤速度，但這個范圍并不固定，難以把握。