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干貨分享 | 細(xì)胞長(zhǎng)不好的原因與解答!

養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中,不知不覺(jué)間可能就會(huì)出現(xiàn)很多問(wèn)題,比如細(xì)胞不長(zhǎng)了、不貼壁了,傳代污染等問(wèn)題,上海東寰生物科技與您一起分享
干貨分享 | 細(xì)胞長(zhǎng)不好的原因與解答!

培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁


可能原因

1.胰蛋白酶消化過(guò)度;

2.支原體污染;

3.培養(yǎng)基pH值過(guò)堿(NaHCO3分解);

4.細(xì)胞老化;

5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。


解決方法

1.縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度;

2.分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;

3.使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2;

4.啟用新的保種細(xì)胞;

5.調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。

懸浮細(xì)胞成簇


可能原因

1.培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子;

2.支原體污染;

3.蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解;

4.DNA污染。


解決方法

1.用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕巧吹吸

2.細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液;

3.分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體;

4.DNasel處理細(xì)胞。

培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢


可能原因

1.由于更換不同培養(yǎng)液或血清;

2.培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必須成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞;

3.培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;

4.試劑保存不當(dāng);

5.接種細(xì)胞起始濃度太低;

6.細(xì)胞已老化;

7.支原體污染。


解決方法

1.比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;

2.換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子;

3.用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;

4.血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;

5.增加接種細(xì)胞起始濃度;

6.換用新的保種細(xì)胞;

7.分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好


可能原因

細(xì)胞本身的狀態(tài)

1. 細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;

2. 細(xì)胞的接種量:接種量過(guò)低,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;

3. 細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng);

4. 胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短:時(shí)間過(guò)長(zhǎng),細(xì)胞死亡;時(shí)間過(guò)短,細(xì)胞未完全分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;

5. 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速溶。


污染

1. 支原體污染;

2. 霉菌污染。


培養(yǎng)基或血清

1. 更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證;

2. 選擇的培養(yǎng)基是否合適;

3. 培養(yǎng)基配制是否合適;

4. 培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤。


培養(yǎng)環(huán)境

1. CO2供應(yīng)是否正常;

2. 培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。


解決方法

根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因,做出針對(duì)性的解決方案

1.注意細(xì)胞的本身狀態(tài):如傳代次數(shù),接種量等;

2.避免產(chǎn)生污染(用正規(guī),合法,可朔源的血清);

3.要用合適的血清或培養(yǎng)基,最好經(jīng)過(guò)驗(yàn)證;

4.注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。

培養(yǎng)細(xì)胞死亡


可能原因

1.培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2;

2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大;

3.細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷;

4.培養(yǎng)液滲透壓不正確;

5.培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。


解決方法

1.檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2;

2.檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;

3.取新的保存細(xì)胞種;

4.檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓;

5.換入新鮮培養(yǎng)液;