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實驗干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理

常用分子生物學(xué)技術(shù)原理,上海東寰生物科技與您一起分享。
實驗干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理

1. 分子雜交與印跡技術(shù)


(1)探針是經(jīng)過特殊標(biāo)記,能與待測單鏈核酸分子互補結(jié)合的已知核酸片段


(2)印跡是將電泳分離后的大分子轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上,以便雜交的技術(shù)


(3)DNA印跡:Southern blotting,用于檢測基因組DNA


(4)RNA印跡:Northern blotting,主要用來檢測mRNA的表達水平


(5)蛋白質(zhì)印跡:Western blotting,用于檢測蛋白質(zhì)的水平

2. PCR技術(shù)


(1)反應(yīng)體系:單鏈DNA模板、特異性DNA引物、耐熱DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)、dNTPs底物、含Mg2+的緩沖液。


(2)反應(yīng)步驟:變性、復(fù)性、延伸


(3)逆轉(zhuǎn)錄PCR:即RT-PCR,在PCR之前先將單鏈mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。這是目前從RNA水平出發(fā)研究基因表達或獲得目的基因最有效的方法。


(4)應(yīng)用:目的基因的克隆、基因的體外突變、微量DNA或RNA擴增、DNA序列測定、基因突變分析

3. 蛋白質(zhì)相互作用研究


酵母雙雜交技術(shù)、CoIP

4. DNA-蛋白質(zhì)相互作用


電泳遷移率變動分析(EMSA)、染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(ChIP)

5. 基因敲除


即gene knock-out,通過同源基因重組原理使得某個基因活性喪失,從而研究該基因功能的方法