1、吸去舊培養(yǎng)液。
2、PBS沖洗3次,每次2ml。
3、吸去PBS,胰酶1.5ml,放入孵育箱,消化4min后取出觀察細(xì)胞懸浮情況。
4、3ml培液中止消化,輕輕吹打至底壁透光,制成細(xì)胞懸液。
5、吸入15ml離心管中,1000r/5min離心。
6、吸去上清,加入1ml凍存液(凍存液配制方法:DMSO和血清按1:9配制成10ml,離心管外面裹一層鋁箔避光,放入4度冰箱保存),吹打均勻,吸入凍存管中。
7、放入梯度降溫盒,-80℃冰箱過(guò)夜。
8、24h后從梯度盒取出凍存管,放入液氮罐保存(長(zhǎng)期保存需放入液氮罐,短期3個(gè)月內(nèi)凍存放入-80攝氏度即可)。