兔角膜上皮細胞的分離培養(yǎng)及鑒定
【簡介】
角膜由角膜上皮細胞、前彈力膜、角膜基質(zhì)、后彈力膜和角膜內(nèi)皮細胞5層結(jié)構(gòu)組成,其中,角膜上皮細胞和角膜內(nèi)皮細胞為其主要成分,它們在維持角膜正常結(jié)構(gòu)和功能中起著重要作用;角膜上皮細胞的體外培養(yǎng),是現(xiàn)代角膜病基礎(chǔ)學(xué)研究的重要方法之一,對研究角膜的生理、病理、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都有極大的意義;
【材料】
3-8周齡兔、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、PBS、DMEM/F12、FBS、培養(yǎng)皿、上皮細胞專用培養(yǎng)液;
【方法】
1)處死,去除頭部皮毛,取出眼球組織;
2)從眼球組織中分離出眼角膜組織;
3)眼角膜組織PBS清洗干凈;
4)組織外壁貼盤,2h后加入上皮專用培養(yǎng)液,2-3d細胞爬出;
【培養(yǎng)】
上皮細胞專用培養(yǎng)液
【鑒定】
1)免疫熒光
陽性:Cytokeratin 18
陰性:vimentin