特發(fā)性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立
一、目的:
博萊霉素致肺纖維化模型建立
二、材料:
博萊霉素藥液配制:4mg/ml(0.9%氯化鈉溶液配制);
三、方法:
1、BALB/c小鼠麻醉,6-8周齡,體重20~25g,仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,頸部去毛后酒精消毒,切開(kāi)皮膚,逐層暴露氣管;
2、將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管,回抽無(wú)阻力;
3、注入博萊霉素0.2~0.3ml(約4~5mg/kg)再向氣管內(nèi)注入0.2ml的空氣2~3次,使藥物在肺部分布均勻;
4、以大鼠身體長(zhǎng)軸為中心,正反快速旋轉(zhuǎn)鼠板1~2分鐘??p合皮膚,局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止感染,室溫保持在24~25℃,待動(dòng)物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。
肺纖維化模型發(fā)展時(shí)間:
2周可見(jiàn)肺系數(shù)(肺重/體重×100%)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見(jiàn)廣泛炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),以淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞為主,并有肺泡壁增厚、成纖維細(xì)胞增生等Ⅱ級(jí)肺泡炎表現(xiàn)。
4周可見(jiàn)肺間質(zhì)內(nèi)有大量散在綠染的膠原纖維,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,見(jiàn)有許多纖維細(xì)胞等Ⅲ級(jí)肺間質(zhì)纖維化病變。
大鼠模型病理組織學(xué)與病理生理學(xué)改變與人類(lèi)肺間質(zhì)纖維化相似。其病變?cè)缙诒憩F(xiàn)為滲出性肺泡炎,炎癥細(xì)胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質(zhì)纖維化,間質(zhì)細(xì)胞增生,基質(zhì)膠原聚集取代正常的肺組織結(jié)構(gòu)。
四、檢測(cè):
組織病理切片HE染色;
對(duì)照組; 實(shí)驗(yàn)組;