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免疫沉淀概述

科研中我們涉及到的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)通常指:免疫共沉淀(Co-IP)、RIP、Chip等等,下面將幾種實(shí)驗(yàn)簡單概述一下。
免疫沉淀概述

      科研中我們涉及到的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)通常指:免疫共沉淀(Co-IP)、RIP、Chip等等,下面將幾種實(shí)驗(yàn)簡單概述一下。

      免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法,屬于免疫沉淀技術(shù)的一類,常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設(shè)計(jì)理念是,假設(shè)一種已知蛋白是某個(gè)大的蛋白復(fù)合物的組成成員,那么利用這種蛋白的特異性抗體,就可能將整個(gè)蛋白復(fù)合物從溶液中“拉”下來(常說的“pull-down”),進(jìn)而可以用于鑒定這個(gè)蛋白復(fù)合物中的其他未知成員。

      一般大致步驟為:抗體與細(xì)胞裂解液或蛋白表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)(或二抗)偶聯(lián)的瓊脂糖微珠(ProteinA/G Magnetic beads)孵育,通過離心得到微珠-蛋白A/G(或二抗)-抗體-目的蛋白復(fù)合物。復(fù)合物沉淀經(jīng)離心洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,沸水浴5-10 min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體(輕鏈和重鏈已斷開)和靶標(biāo)蛋白。該上清混合物經(jīng)SDS-PAGE電泳分離和Western blotting顯影,其后依據(jù)顯影后的膠片上是否有目的蛋白條帶,來判斷免疫沉淀實(shí)驗(yàn)是否成功。