細(xì)胞凋亡,又稱細(xì)胞程序性死亡,是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下,遵循自身的程序,自己結(jié)束其生命的過程。那么它的早期檢測有哪些呢?下面跟隨上海東寰來看一下吧。
1、 PS(磷脂酰絲氨酸)在細(xì)胞外膜上的檢測:
PS從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)移到外側(cè)在細(xì)胞受到凋亡誘導(dǎo)后不久發(fā)生, 可能作為免疫系統(tǒng)的識(shí)別標(biāo)志。AnnexinV,一個(gè)鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白,能專一性的結(jié)合暴露在膜外側(cè)的PS,再通過簡單的顯色或發(fā)光系統(tǒng)進(jìn)行檢測。由于這是一種凋亡早期的活細(xì)胞檢測(懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞都適用),可與DNA染料或別的晚期檢測方法相結(jié)合來標(biāo)記凋亡的發(fā)展階段。
2、細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)改變的檢測
正常狀態(tài)下,谷光苷肽(glutathione:GSH)作為細(xì)胞的一種重要的氧化還原緩沖劑。細(xì)胞內(nèi)有毒的氧化物通過被GSH還原而定期去除,氧化型的GSH又可被GSH還原酶迅速還原。這一反應(yīng)在線粒體中尤為重要,許多呼吸作用中副產(chǎn)物的氧化損傷將由此被去除。在Jurcat和一些其它類型的細(xì)胞中,細(xì)胞膜中有可被凋亡信號(hào)啟動(dòng)的ATP依賴的GSH轉(zhuǎn)移系統(tǒng)。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)GSH的排除非?;钴S時(shí),細(xì)胞液就由還原環(huán)境轉(zhuǎn)為氧化環(huán)境,這可能導(dǎo)致了凋亡早期細(xì)胞線粒體膜電位的降低,從而使細(xì)胞色素C(三羧酸循環(huán)中的重要組分)從線粒體內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞液中,啟動(dòng)凋亡效應(yīng)器caspase的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。
由于 GSH與氧化還原作用及線粒體功能密切相關(guān),此項(xiàng)檢測除了對(duì)研究細(xì)胞凋亡的起始非常有用外,還可用于心臟病、中風(fēng)等疾病醫(yī)治的研究。但有些細(xì)胞如:HeLa和3T3細(xì)胞凋亡時(shí)沒有明顯的GSH水平的變化,不能用此法檢測。
3、細(xì)胞色素C的定位檢測
細(xì)胞色素C作為一種信號(hào)物質(zhì),在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要的作用。正常情況下,它存在于線粒體內(nèi)膜和外膜之間的腔中,凋亡信號(hào)刺激使其從線粒體釋放至細(xì)胞液,結(jié)合Apaf-1(apoptotic protease activating factor-1)后啟動(dòng)caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)。
細(xì)胞色素C氧化酶亞單位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ:COX4)是定位在線粒體內(nèi)膜上的膜蛋白,凋亡發(fā)生時(shí),它保留在線粒體內(nèi),因而它是線粒體富集部分的一個(gè)非常有用的標(biāo)志。Cytochrome cApoptosis Assay Kit試劑盒可以有效地檢測凋亡過程中細(xì)胞色素c的釋放情況。
4、線粒體膜電位變化的檢測
在凋亡研究的早期,從形態(tài)學(xué)觀測上線粒體沒有明顯的變化。隨著凋亡機(jī)制研究的深入,發(fā)現(xiàn)線粒體凋亡也是細(xì)胞凋亡的重要組成部分,發(fā)生很多生理生化變化。例如,在受到凋亡誘導(dǎo)后線粒體轉(zhuǎn)膜電位會(huì)發(fā)生變化,導(dǎo)致膜穿透性的改變。MitoSensorTM,一個(gè)陽離子性的染色劑,對(duì)此改變非常敏感,呈現(xiàn)出不同的熒光染色。正常細(xì)胞中,它在線粒體中形成聚集體,發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光。凋亡細(xì)胞中,因線粒體穿膜電位的改變,它以單體形式存在于細(xì)胞液中,發(fā)出綠色熒光。用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可清楚地分辨這兩種不同的熒光信號(hào)。
以上就是細(xì)胞凋亡早期的一些檢測,希望
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