免疫沉淀技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)間交互作用的生物技術(shù),這種技術(shù)是將蛋白質(zhì)視為抗原,并利用抗體與之進(jìn)行特異性結(jié)合的特性,來進(jìn)行研究。這項(xiàng)技術(shù)可用來將含有上千種不同蛋白質(zhì)的樣品中,分離和濃縮出特定蛋白質(zhì)。進(jìn)行免疫沉淀法時(shí),抗體需要和一個(gè)受質(zhì)結(jié)合,下面就由上海東寰給大家簡要介紹。
免疫沉淀技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)間交互作用的生物技術(shù),這種技術(shù)是將蛋白質(zhì)視為抗原,并利用抗體與之進(jìn)行特異性結(jié)合的特性,來進(jìn)行研究。這項(xiàng)技術(shù)可用來將含有上千種不同蛋白質(zhì)的樣品中,分離和濃縮出特定蛋白質(zhì)。進(jìn)行免疫沉淀法時(shí),抗體需要和一個(gè)受質(zhì)結(jié)合,下面就由上海東寰給大家簡要介紹。
RIP 實(shí)驗(yàn)基本原理:
1. 用抗體或表位標(biāo)記物捕獲細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)中內(nèi)源性的RNA結(jié)合蛋白;
2. 防止非特異性的RNA的結(jié)合;
3. 免疫沉淀把RNA結(jié)合蛋白及其結(jié)合的RNA一起分離出來;
4.結(jié)合的RNA序列通過microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量測序(RIP-Seq)方法來鑒定。
免疫沉淀是基于傳統(tǒng)親和純化方法開發(fā)的,在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A-Beads (預(yù)先將Protein A固定結(jié)合在磁珠上),根據(jù)抗原與抗體、ProteinA與抗體的FC的特異性,形成“抗原-抗體-ProteinA-Beads”復(fù)合物,清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白,檢測是否存在目的蛋白。與傳統(tǒng)的柱式親和純化相比,免疫沉淀的目標(biāo)是只分離足夠用于Western Blot或其他檢測方法檢測的蛋白質(zhì)。通??梢詫⒁烟幚砗臀刺幚淼臉悠愤M(jìn)行比較,從而評估目標(biāo)蛋白的相對量。
在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中,用于檢測的抗體可以是預(yù)固定的,或者是游離的。通常,預(yù)固定抗體法更適用于IP,但是,當(dāng)目標(biāo)蛋白濃度較低、抗體與抗原的結(jié)合親和力較弱的情況下,可以使用游離的抗體形成免疫復(fù)合物,效果會比較好。
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