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實驗干貨 | 常用分子生物學技術原理

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實驗干貨 | 常用分子生物學技術原理

1. 分子雜交與印跡技術

(1)探針是經(jīng)過特殊標記,能與待測單鏈核酸分子互補結合的已知核酸片段

(2)印跡是將電泳分離后的大分子轉印到硝酸纖維素膜上,以便雜交的技術

(3)DNA印跡:Southern blotting,用于檢測基因組DNA

(4)RNA印跡:Northern blotting,主要用來檢測mRNA的表達水平

(5)蛋白質印跡:Western blotting,用于檢測蛋白質的水平

2. PCR技術

(1)反應體系:單鏈DNA模板、特異性DNA引物、耐熱DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)、dNTPs底物、含Mg2+的緩沖液。

(2)反應步驟:變性、復性、延伸

(3)逆轉錄PCR:即RT-PCR,在PCR之前先將單鏈mRNA逆轉錄成cDNA。這是目前從RNA水平出發(fā)研究基因表達或獲得目的基因最有效的方法。

(4)應用:目的基因的克隆、基因的體外突變、微量DNA或RNA擴增、DNA序列測定、基因突變分析

3. 蛋白質相互作用研究

酵母雙雜交技術、CoIP

4. DNA-蛋白質相互作用

電泳遷移率變動分析(EMSA)、染色質免疫沉淀技術(ChIP)

5. 基因敲除

即gene knock-out,通過同源基因重組原理使得某個基因活性喪失,從而研究該基因功能的方法