兔胃黏膜上皮細胞分離培養(yǎng)及鑒定

【簡介】

胃黏膜上皮細胞是被覆于胃黏膜表面的單層柱狀細胞，在胃黏膜表面排列整齊，頂部細胞質充滿黏原顆粒，胃是消化系統(tǒng)的重要器官，胃黏膜上皮細胞直接接觸大量來自外界的及內部代謝產生的損傷物，由于許多消化系疾病均與胃黏膜損傷有關，而胃黏膜上皮細胞是保護胃黏膜的最重要屏障，故對胃黏膜上皮細胞的研究尤顯重要；

【材料】

3-8周齡兔、手術剪、手術鑷、75%酒精、雙抗、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、DMEM、PBS、D-Hanks；

消化液：MEM(25ml)、 II型膠原酶（0.15%）、胰酶（0.25%）；

【方法】

1）非禁食兔麻醉，打開腹腔，將胃取出，放入冰冷的生理鹽水中沖洗胃表面，洗滌胃內容物和黏液；

2）將組織浸泡在預冷含雙抗的D-Hanks中5min；

3）將胃組織攤開，浸泡在消化液中，消化15min；

4）搜集細胞懸液，過200目網篩，D-Hanks離心800r/5min,2次；

5）上皮專用培養(yǎng)液種盤，40分鐘后，上清換盤培養(yǎng)，利用差速貼壁去除雜細胞；

【培養(yǎng)】

上皮專用培養(yǎng)基

【鑒定】

1）免疫熒光：

陽性：ck18

陰性：vimentin