蛋白抽提/Western Blotting 技術(shù)服務(wù)

Western Blotting 技術(shù)服務(wù)
(DH1004)

 
一.服務(wù)內(nèi)容
1、蛋白提?。簭娜嘶騽?dòng)物細(xì)胞、組織，細(xì)胞等樣品中提取蛋白樣品。
2、蛋白定量：對(duì)樣品中蛋白進(jìn)行半定量分析。
3、Western Blot檢測(cè)
（1）電泳：聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）分離蛋白樣品。
（2）濕法轉(zhuǎn)印。
（3）雜交：用抗體鑒定膜上的特定蛋白。
（4）顯色：ECL熒光顯色，黑條帶白背景照片
4、提供蛋白內(nèi)參檢測(cè)（所有內(nèi)參抗體均不收取費(fèi)用）。
5、預(yù)實(shí)驗(yàn)及正式實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
 
二. 樣品要求
1、細(xì)胞＞1×10^7；組織＞30mg；細(xì)菌濕重＞1mg等。
2、樣品蛋白濃度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/樣品。
3、建議提供目的蛋白陽(yáng)性表達(dá)樣品（純蛋白、有陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞或組織、商品化的陽(yáng)性對(duì)照產(chǎn)品等）作為陽(yáng)性對(duì)照。
注：若有特殊處理的樣品，請(qǐng)盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。
 
三. 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
 

四、客戶提供材料
1、樣品：新鮮或正確保存的樣品以及與樣品相關(guān)的必要資料（具有保密性的材料除外）。
2、目的蛋白相應(yīng)一抗：請(qǐng)您提供質(zhì)量保證的一抗（或委托我公司準(zhǔn)備）。抗體的使用量通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行確認(rèn)，原則上不回收使用一抗。
3、陽(yáng)性對(duì)照樣品（盡量提供）。
4、相關(guān)文獻(xiàn)（可選）。
注：若要檢測(cè)磷酸化蛋白，請(qǐng)?jiān)?span style="box-sizing:border-box;margin:0px;padding:0px;">2-3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間保存的樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測(cè)不到磷酸化條帶。
 
五、提交給客戶結(jié)果
1、預(yù)實(shí)驗(yàn)顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式），預(yù)實(shí)驗(yàn)采取3個(gè)一抗稀釋度，選取部分實(shí)驗(yàn)樣本。
2、正式實(shí)驗(yàn)顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式）。
3、完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
 
六、服務(wù)項(xiàng)目說(shuō)明
1、提供的蛋白量與待檢測(cè)的目的蛋白數(shù)量有關(guān)，蛋白數(shù)量增加相應(yīng)的樣品量也要增加。
2、每張膜樣品數(shù)量為1-8個(gè)，不足8個(gè)以8個(gè)收取。9-16個(gè)樣品為2張膜，17-24個(gè)樣品為3張膜；以此類推。
舉例：7個(gè)樣品，1個(gè)目的蛋白，算1張膜；有9個(gè)樣品，1個(gè)目的蛋白，算2張膜；7個(gè)樣品，2個(gè)目的蛋白，算2張膜，有9個(gè)樣品，2個(gè)目的蛋白，算4張膜。
注：以上為一般算法。如果客戶樣品數(shù)量需要按照組別等來(lái)進(jìn)行上樣時(shí)，需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數(shù)。
3、選擇部分樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，參考目的蛋白一抗說(shuō)明書進(jìn)行3個(gè)稀釋度的預(yù)實(shí)驗(yàn)。
4、向客戶反饋預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，等待客戶確認(rèn)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果后確定是否進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。
5、提供內(nèi)參檢測(cè)為：β-actin，GAPDH等。
8、對(duì)條帶結(jié)果有特殊要求，請(qǐng)另詢價(jià)。
9、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動(dòng)預(yù)實(shí)驗(yàn)。