1、吸去舊培養(yǎng)液。

2、PBS沖洗3次，每次2ml。

3、吸去PBS，胰酶1.5ml，放入孵育箱，消化4min后取出觀察細胞懸浮情況。

4、3ml培液中止消化，輕輕吹打至底壁透光，制成細胞懸液。

5、吸入15ml離心管中，1000r/5min離心。

6、吸去上清，加入1ml凍存液（凍存液配制方法：DMSO和血清按1:9配制成10ml,離心管外面裹一層鋁箔避光，放入4度冰箱保存），吹打均勻，吸入凍存管中。

7、放入梯度降溫盒，-80℃冰箱過夜。

8、24h后從梯度盒取出凍存管，放入液氮罐保存（長期保存需放入液氮罐，短期3個月內(nèi)凍存放入-80攝氏度即可）。